Koira, joka räjähti

Markkinoilla on hurja määrä erilaisia valmisteita, joita mainostetaan koiria (ja muitakin eläimiä) rauhoittavina tuotteina. Kaikki valmisteet eivät ole lääkkeitä, vaan esimerkiksi ravintolisiä ja luontaistuotteita, joiden (väitetyt) vaikutusmekanismit vaihtelevat. Eläinlääkäri suositteli meillekin näiden kokeilua, kun Kiran räjähtely oli pahimmillaan. Näinpä päädyin testaamaan Serene-UM:ia(*), Adaptilia(*) ja suihkauttipa joku Kiran pantaan Rescue remedyäkin jollakin koirakoulun kurssilla. Markkinointimaailma on aika villi, ja useammankin kuin kerran olen itse pähkäillyt näiden tuotteiden äärellä onko niistä mitään todellista hyötyä ja mihin niiden väitetty vaikutus todella perustuu. Tässä blogisarjassa otankin selvää, mitä tieteellistä näyttöä näiden rauhoittavien valmisteiden tueksi todella on olemassa. Keskityn valmisteisiin jotka eivät ole lääkkeitä ja jotka ovat siten saatavilla ja käytettävissä ilman eläinlääkärin reseptiä.

Tämän blogisarjan toisessa osassa syvennyn mihin α-kasotsepiinin rauhoittavaksi väitetty vaikutus perustuu ja mitä tutkimukset kertovat sen todellisesta tehosta. α-kasotsepiini on vaikuttavana aineena Zylkenessä ja lisäksi sitä on Royal Caninin Calm-koiran- ja kissanruoissa(*).

α-kasotsepiini - mitä se on?

Varoitus, tämä osio sisältää paljon vaikeasti muistettavia sanoja ja lyhenteitä, mutta koitetaan mennä hitaasti, niin pysytään kärryillä.

α-kasotsepiini (tai α_S1-kaseiini (f91–100)) on lehmänmaidon α_S1-kaseiinista eristetty dekapeptidi, eli kymmenen aminohapon muodostama aminohappoketju (tyrosiini-leusiini-glysiini-tyrosiini-leusiini-glutamiinihappo-glutamiini-leusiini-leusiini-arginiini, jos siis ihan tismalleen tarkkoja halutaan olla...). Kyse on siis valkuaisaineista eli proteiinista.  α-kasotsepiinia muodostuu kaseiinista vasta, kun kaseiini pilkotaan, eli hydrolysoidaan, trypsiini-nimisen ruoansulatusentsyymin avulla ruuansulatuskanavassa tai teollisen prosessin kautta. Tämän johdosta englanninkielisessä termistössä α-kasotsepiiniin viitataankin välillä termillä casein tryptic hydrolysate. Maidon kaseiinilla itsessään ei siis ole minkäänlaista biologisesti rauhoittavaa vaikutusta, vaan osa sen sisältämistä aminohappoketjuista saa aikaan rauhoittavia vaikutuksia, kun ne pilkotaan erilleen trypsiinin toimesta. Kaseiini muodostaa maidon valkuaisaineista suurimman osan, mutta α-kasotsepiinia se sisältää varsin vähän. Koiraa siis voi toki koittaa rauhoittaa (laktoosittomalla) maidollakin, mutta se on todennäköisesti aika tehoton vaihtoehto.

α-kasotsepiinista tekee erikoisen se, että sen avaruudellinen rakenne muistuttaa gamma-aminovoihappoa (GABA), joka on yksi tärkeimmistä hermosolujen toimintaa jarruttavista välittäjäaineista. α-kasotsepiini sitoutuu samankaltaisen rakenteensa vuoksi hermosolujen GABA_A -reseptoreihin, samaan paikkaan johon sitoutuvat myös bentsodiatsepeenit. Bentsodiatsepeenit puolestaan ovat psyykenlääkkeitä, jotka vaikuttavat rauhoittavasti ja nukahtamista helpottavasti. Yhteisen sitoutumispaikkansa vuoksi bentsodiatsepeeneilla ja α-kasotsepiinilla on samankaltainen, rauhoittava vaikutus. Siinä missä bentsodiatsepeenit ovat kuitenkin riippuvuutta aiheuttavia lääkkeitä, α-kasotsepiini on reseptivapaa ravintolisä, joka ei aiheuta riippuvuutta, vaikuta turruttavasti, ole myrkyllinen, eikä sillä ole muitakaan tunnettuja haittavaikutuksia.

Hmm, kuulostaa hyvältä!

Hiirikokeet osoittavat, että α-kasotsepiini, kuten bentsodiatsepeenitkin, vähentäää hermosolujen aktivaatiota 40-60 % normaaliin verrattuna useissa eri aivojen osissa. Sekä α-kasotsepiini että bentsodiatsepeenit vähensivät hermosolujen aktivaatiota  aivokuoren etuotsalohkossa, hippokampuksessa, isoaivojen pohjassa olevassa makaavassa tumakkeessa (nucleus accumbens) sekä hypotalamuksessa. Näiden aineiden rauhoittava vaikutus perustuukin juuri tähän aivojen hermosolujen "hiljentämiseen". Toisin kuin bentsodiatsepeenit, α-kasotsepiini kuitenkin myös lisäsi mantelitumakkeen hermosolujen aktivaatiota jopa kolminkertaisesti normaaliin verrattuna. Kokeessa α-kasotsepiini vaikutti stressaavassa tilanteessa hiiriin rauhoittavasti bentsodiatsepeenien tavoin, mutta koska α-kasotsepiini lisäsi myös mantelitumakkeen aktivaatiota, tutkijat pohtivat josko näillä aineilla olisi kuitenkin jollakin tavalla hieman erilainen vaikutusmekanismi. Myös rottakokeiden perusteella α-kasotsepiinin rauhoittava vaikutus olisi ihan yhtä tehokas kuin bentsodiatsepiinienkin.

Hiirikokeissa on osoitettu, että α-kasotsepiini myös parantaa lievästä, kroonisesta stressistä kärsivien hiirten unen laatua. Huomattavaa on se, että α-kasotsepiini ei vaikuttanut lainkaan stressaamattomien hiirien unen laatuun. α-kasotsepiini ei siis ole "yleisrauhoite" ja sen vaikutus ei ole turruttava (tai oikeilla lääketieteen termeillä sedatiivinen), vaan sen rauhoittava vaikutus näkyy vain niillä yksilöillä, jotka ovat ihan oikeasti stressaantuneet tai kärsivät muusta emotionaalisesta järkytyksestä.

Ei kuitenkaan ole ollenkaan selvää, miten suun kautta nautittu α-kasotsepiini päätyy vaikuttamaan aivojen hermosolujen GABA_A-reseptoreihin. Aikuisella, terveellä yksilöllä suolen limakalvo muodostaa esteen, jonka läpi eivät yleensä pääse sellaiset aminohappoketjut (peptidiketjut), jotka ovat yli kolmen aminohapon mittaisia. Kuten sanottua, α-kasotsepiini on kymmenen aminohapon muodostama peptidiketju. On olemassa useita teorioita α-kasotsepiinin vaikutusmekanismista. Totuutta ei kuitenkaan tällä hetkellä vielä tiedetä.
 A) On mahdollista, että α-kasotsepiini pilkotaan suolistossa niin lyhyiksi aminohappoketjuiksi, että ne voivat läpäistä suolen limakalvon ja päätyä verenkiertoon. Tällöin α-kasotsepiinin rauhoittavan vaikutuksen täytyisi johtua vain muutaman aminohapon yhdistelmästä. Hiljattain julkaistu tutkimus on osoittanut, että kun 10 aminohapon mittaista α-kasotsepiinia on pilkottu ruoansulatusentsymien avulla lisää, sen kolmesta aminohaposta muodostuvalla hajotustuotteella voisi olla vastaavia rauhoittavia vaikutuksia kuin kokonaisella α-kasotsepiinillakin. Kolmen aminohapon muodostama molekyyli voisi jo läpäistä suolen limakalvon.
B) Suolen limakalvo saattaa ehkä muuttua helpommin läpäistäväksi stressin ym. emotionaalisen järkytyksen yhteydessä, jolloin isommatkin molekyylit pääsisivät sen läpi verenkiertoon ja siten α-kasotsepiini voisi edelleen kulkeutua aivoihin.
C) Voi myös olla mahdollista, että suolistossa itsessään on hermosolureseptoreja, joihin α-kasotsepiini voi sitoutua ja joiden kautta α-kasotsepiinin rauhoittava vaikutus voi välittyä aivoihin.

Kuva: Julianna/Flickr

Faktat tiskiin, A: α-kasotsepiinin tutkittu vaikutus koiriin

Koirilla α-kasotsepiinia on tutkittu aika vähän. Esittelen tässä alla lyhyesti kaikki löytämäni koirilla tehdyt α-kasotsepiinitutkimukset. Lisäksi täydennän jäljempänä näitä muilla eläinlajeilla tehdyillä tutkimuksilla.

Tutkimus 1: Beata ym. 2007b
Tutkimuksen tavoite: Kokeessa verrattiin peloikkailla koirilla α-kasotsepiinin vaikutusta selegiliiniin, joka on lääke, jota käytetään koirilla pelokkuuden ja dementian hoitoon.
Tutkimusasetelma: Kokeessa oli mukana 38 pelokkuudesta kärsivää koiraa ja kokeen kesto oli 56 päivää. Koirille annettiin koko kokeen ajan joko α-kasotsepiinia 15 mg/elopaino-kg/vrk tai selegiliiniä 0,5 mg/elopaino-kg/vrk. Molemmat aineet annettiin koirille suun kautta. Tutkimus oli kaksoissokkotutkimus, eli tutkimuksen tekijät ja koiranomistajat eivät tienneet kumpaa valmistetta koirat saivat. Koirien käyttäytymistä arvioitiin sekä tutkijoiden että koiranomistajien taholta ennen kokeen alkua ja 14, 28, 42 ja 56 päivän kuluttua kokeen alkamisesta.
Tulokset: Molemmat tutkitut valmisteet vaikuttivat koiriin yhtä rauhoittavasti sekä koiranomistajien että tutkijoiden arvion perusteella. Valmisteiden välillä ei ollut eroa siinä kuinka nopeasti käyttäytymismuutoksia havaittiin tai kuinka suuria muutokset olivat. Tämän tutkimuksen perusteella α-kasotsepiini siis soveltuu käytettäväksi koirilla pelkotilojen hoidossa muun koulutuksen ohessa.

Tutkimus 2: Palestrini ym. 2010
Tutkimuksen tavoite: Kokeessa selvitettiin miten kaseiinihydrosylaatti (jonka osa α-kasotsepiini on) vaikuttaa pelokkaiden ja ei-pelokkaiden koirien stressitasoon ja käyttäytymiseen.
Tutkimusasetelma: Kokeessa oli mukana yhteensä 32 koiraa, joista puolet oli käyttäytymisen perusteella luokiteltu ennakkoon pelokkaiksi ja puolet ei-pelokkaiksi. Sekä pelokkaiden että ei-pelokkaiden koirien ryhmä jaettiin kahteen alaryhmään, joista toinen sai ruokaa, jossa oli kaseiinihydrosylaattia ja toinen oli kontrolliruokinnalla ilman kaseiinihydrosylaattia. Kokeessa käytetyn kaseiinihydrosylaatin annostustasoa ei kerrottu. Tutkimus oli plasebokontrolloitu kaksoissokkotutkimus, eli tutkimuksen tekijät ja eläintenhoitajat eivät tienneet kumpaa ruokaa kukin koira sai. Kokeen kesto oli yhteensä 60 päivää. Ennen koetta, kokeen puolivälissä ja sen lopuksi oli kaksipäiväinen arviointijakso, jonka aikana koirien käyttäytyminen arvioitiin samalla asteikolla, jolla koirat oli alunperin luokiteltu pelokkaiksi tai pelottomiksi. Lisäksi koirilta mitattiin syke ja otettiin verinäyte, josta määritettiin kortisoli- ja lysotsyymipitoisuus ja valkosolujen määrä. Koirien käyttäytymistä myös videoitiin 10 minuutin ajan, kun koira oli sijoitettu yksin vieraaseen huoneeseen, jossa koiralle oli tarjolla ruokaa, juomaa ja lelu.
Tulokset: Kokeen alkaessa peloikkaiden koirien ryhmä oli käyttäytymispisteytyksen perusteella selvästi ei-pelokkaita koiria pelokkaampi (eli toisinsanoen, koeasetelma ja koirien ryhmittely käyttäytymisen perusteella oli onnistunut). Kokeen kuluessa pelokkaat koirat, jotka saivat kaseiinihydrosylaattia, muuttuivat käyttäytymispisteytyksen perusteella vähemmän pelokkaiksi, eivätkä kokeen lopussa eronneet käyttäytymisen perusteella pelottomien koirien ryhmästä. Veren kortisolipitoisuudet olivat normaalirajoissa kaikilla koirilla koko kokeen ajan. Kokeen kuluessa veren kortisolipitoisuudet pienenivät kaseiinihydrosylaattia saaneiden pelokkaiden ja ei-pelokkaiden koirien ryhmässä. Vastaavaa ei havaittu kontrolliruokinnalla, joka ei sisältänyt kaseiinihydrosylaattia. Ruokinnalla ei ollut vaikutusta koirien sykkeeseen tai valkosoluarvoihin.Tämän tutkimuksen perusteella kaseiinihydrosylaattia (α-kasotsepiinia) voidaan mahdollisesti käyttää helpottamaan koirien stressioireita ja pelokkuutta.

Tutkimus 3: Werner, 2013
Tutkimuksen tavoite: Kokeessa tutkittiin α-kasotsepiinin ja käyttäytymisterapian vaikutusta koirien eroahdistukseen.
Tutkimusasetelma: Kokeessa oli 75 eroahdistuksesta kärsivää koiraa ja kokeen kesto oli 4 viikkoa. Koirille annettiin suun kautta joko α-kasotsepiinia (15 mg/elopaino-kg/vrk) tai plaseboa. Koe oli plasebokontrolloitu, satunnaistettu kaksoissokkotutkimus, eli koirat jaettiin satunnaisesti kahdelle koeruokinnalle ja tutkimuksen tekijät ja koirien omistajat eivät tienneet kumpaa ruokaa kukin koira sai. Kaikkien koirien omistajat saivat kokeen alkaessa ammattilaisen antamat käyttäytymisterapiaohjeet ja kaikkien koirien kanssa suoritettiin näihin liittyviä yksinolo- ym. harjoitteita kokeen aikana. Tutkimuksessa seurattiin koiran yksinoloajan kestoa ja mitattiin koiran käyttäytymistä.
Tulokset: Sekä pelkkä käytösterapia, että α-kasotsepiini yhdessä käytösterapian kanssa auttoivat koirien eroahdistukseen 4 viikon koejakson aikana. α-kasotsepiinia saaneiden koirien ryhmä tarvitsi kuitenkin selvästi vähemmän käytösterapiaharjotusta kuin pelkkää käytösterapiaa saaneiden ryhmä saman lopputuloksen aikaansaamiseksi. Käytösterapian vaikutukset olivat kuitenkin paljon pysyvämpiä pelkällä käytösterapialla (ts. plaseboruokinnalla) olleilla koirilla, kun koirien eroahdistuksen tasoa arvioitiin uudelleen 4 viikkoa α-kasotsepiinin tai plasebon annostelun lopettamisesta. Tutkijat pohtivat, että tämä saattoi johtua siitä, että α-kasotsepiini auttoi koirien eroahdistukseen hetkellisesti sen annostelun aikana, mutta koska näiden koirien kanssa ei tehty eroahdistusharjoitteita yhtä ahkerasti kuin plaseboa saaneiden koirien kanssa, muutokset koirien perimmäisessä käyttäytymisessä jäivät heikoiksi kun α-kasotsepiinin annostelu lopetettiin. α-kasotsepiini ei siis itsessään muuttanut käyttäytymistä, vaan auttoi hetkellisesti käytösoireilua. Tämän tutkimuksen mukaan α-kasotsepiinilla voidaan siis helpottaa hetkellisesti eroahdistuksesta kärsivien koirien oireilua, mutta pysyviä käyttäytymismuutoksia saatiin aikaiseksi vain käyttäytymisterapian avulla ja siten se on edelleen tärkein osa eroahdistuksen hoitoa.

Lisäksi α-kasotsepiinin vaikutusta on tutkittu yhdessä tryptofaanin kanssa Katon ym. (2012) tutkimuksessa, jota olen jo käsitellyt aikaisemmassa, tryptofaania koskevassa kirjoituksessani. Myös tässä Katon ym. (2012) tutkimuksessa todettiin, että α-kasotsepiinia ja tryptofaania sisältänyt ruokinta (Royal Canin calm(*)) vähensi pelokkaiden koirien stressireaktioita eläinlääkärikäynnin yhteydessä. Koeasetelmasta johtuen ei kuitenkaan ollut selvää, johtuiko vaikutus α-kasotsepiinista vai tryptofaanista. Näiden aiempien α-kasotsepiini-tutkimusten perusteella oma tulkintani on se, että todennäköisesti vaikutus johtuu juuri α-kasotsepiinista, eikä tryptofaanista, sillä tryptofaanin teoreettisesti rauhoittavaa vaikutusta ei ole onnistuttu todistamaan koirilla (kts. aiempi tryptofaanikirjoitukseni).

Kuva: Vittorio Vittori/Flickr

Faktat tiskiin, B: α-kasotsepiinin tutkittu vaikutus muihin eläimiin (lyhyesti)

Tutkimus 4: Beata ym. 2007a
Kokeessa tutkittiin α-kasotsepiinin vaikutusta pelokkaiden kissojen käyttäytymiseen sosiaalisesti stressaavassa tilanteessa. Plaseboon verrattuna α-kasotsepiini (annostustaso 15 mg/elopaino-kg/vrk) vähensi kissojen pelokkuutta ja sai ne hakeutumaan helpommin sekä tuttujen että vieraiden ihmisten seuraan. α-kasotsepiini ei vaikuttanut kissojen aggressiivisen käyttäytymisen esiintymiseen.

Tutkimus 5: Miyaji ym. 2015
Kokeessa tutkittiin Royal Caninin calm-kissanruoan(*) vaikutusta "normaalien" kissojen (eivät siis kärsineet huomattavista peloista tms.) stressivasteeseen eläinlääkärikäynnin yhteydessä. Kyseinen kissanruoka sisältää sekä α-kasotsepiinia että tryptofaania. Plasman tryptofaanipitoisuudet lisääntyivät calm-kissanruoan antamisen myötä, samoin tryptofaanin suhde muihin kilpaileviin aminohappohin lisääntyi plasmassa (olen käsitellyt tämän seikan merkitystä aiemmassa tryptofaanikirjoituksessani). Ruokinnalla ei ollut vaikutusta plasman kortisolipitoisuuteen (kuvastaa akuuttia stressivastetta), mutta calm-ruokinta vähensi virtsan kortisolipitoisuutta (kuvastaa stressitasoa pitkällä aikavälillä). Omistajien tekemässä käyttäytymisarvioinnissa ei ollut eroja kahden ruokintakäsittelyn välillä.

Tutkimus 6: Landsberg ym., 2016
Kokeessa tutkittiin Royal Caninin calm-kissanruoan(*) vaikutusta lievästi tai voimakkaasti pelokkaiden kissojen suhtautumiseen puolituttuun ja vieraaseen ihmiseen, ja kissan käyttäytymiseen kun se sijoitettiin vieraaseen, pieneen ja tyhjään huoneeseen. Calm-ruokaa saaneet kissat liikkuivat vieraassa ympäristössä aktiivisemmin ja yhtäjaksoisemmin kuin kontrolliruokinnalla olleet kissat. Ruokinnalla ei ollut vaikutusta siihen, miten kissat suhtautuivat vieraaseen ihmiseen. Tutkijat pohtivat, että kissojen pelko ihmisiä kohtaan saattoi olla liian voimakasta, jotta pelkällä calm-ruoalla olisi saatu käyttäytymismuutoksia aikaiseksi.

Tutkimus 7: McDonnell ym., 2013
Kokeessa tutkittiin miten α-kasotsepiinin antaminen (1000 mg/pv) vaikutti puolivillien ponien stressireaktioihin ja käyttäytymiseen, kun ponit erotettiin perhelaumoistaan ja totutettiin normaaliin käsittelytoimenpiteisiin positiivista vahvistamista käyttäen. α-kasotsepiini helpotti ponien kesyyntymisprosessia verrattuna poneihin, jotka eivät saaneet α-kasotsepiinia lainkaan. α-kasotsepiinia saaneet ponit olivat käyttäytymispisteytyksen perusteella vähemmän stressaantuneita ja oppivat koulutettavat asiat helpommin kuin ponit, jotka eivät saaneet α-kasotsepiinia.

Tutkimus 8: McDonnell ym., 2014
Kokeessa tutkittiin miten α-kasotsepiinin antaminen (2000 mg/pv) vaikutti käsittelyyn tottuneiden hevosten käyttäytymiseen, kun niille tehtiin lievästi epämiellyttäviä toimenpiteitä kuten verinäytteen otto, lääkitys suun kautta, lääketippojen laittaminen silmiin ja lastaus traileriin. Hevoset, joille oli annettu α-kasotsepiinia, antoivat käsitellä itseään jonkin verran helpommin ja olivat vähemmän stressaantuneita näiden toimenpiteiden aikana kuin ne hevoset, jotka eivät olleet saaneet α-kasotsepiinia.

Mitä tästä kaikesta opimme?

Kaikissa löytämissäni tutkimuksissa, joiden tulokset olen yllä esitellyt, α-kasotsepiinin on havaittu helpottavan eläinten stressiä ja/tai pelkoa erilaisissa stressaavissa ja/tai pelottavissa tilanteissa. α-kasotsepiinin rauhoittava vaikutus on todistettu hiirillä, rotilla, koirilla ja kissoilla. Lisäksi positiivisia tuloksia on saatu myös ihmisillä tehdyissä tutkimuksissa, vaikka näitä tutkimuksia en tämän tekstin yhteydessä ole käsitellytkään. α-kasotsepiini kuitenkin näyttäisi vaikuttavan rauhoittavasti vain sen annostelun ajan, joten siten se mahdollisesti soveltunee parhaiten käytettäväksi väliaikaisten stressitilojen hoidossa ja muun koulutuksen yhteydessä. On erittäin tärkeää ja olennaista huomata, että vaikka α-kasotsepiini vaikuttaa rauhoittavasti, se itsessään ei vaikuta eläimen käyttäytymiseen pysyvästi. Pysyvien muutosten aikaansaamiseksi käytösterapia ja eläimen systemaattinen, positiiviseen vahvistamiseen perustuva kouluttaminen on edelleen välttämätöntä. Tätä prosessia voidaan kuitenkin tarvittaessa tukea erilaisten rauhoittavien valmisteiden, kuten α-kasotsepiinin avulla. Eläimen rauhallisemman mielentilan jatkuva tukeminen pelkän α-kasotsepiinin (tai muiden rauhoittavien ravintolisien) avulla ei ole suositeltavaa eettisistä(kään) syistä, vaan eläimen käsittelyn tulee aina olla mahdollisimman vähän stressaavaa ja pohjautua siihen, että eläin totutetaan/koulutetaan vähitellen pärjäämään paremmin kohtaamissaan haastavissa tilanteissa. Tämän lisäksi itselleni on vielä epäselvää onko α-kasotsepiinin pitkäaikaisvaikutuksia tutkittu. Kaikissa yllä esitellyissä tutkimuksissa α-kasotsepiinin annostelu on ollut lyhytaikaista (max. 60 päivää).


PS. Tämä kirjoitussarja saanee jatkoa myös tulevaisuudessa, minkä rauhoittavan valmisteen vaikutusmekanismeista ja todistetuista vaikutuksista haluaisit lukea lisää?

Tekstin sisältämät kaupalliset linkit on ilmoitettu (*)-merkinnällä.


Lähteet:

• Beata, C, Beaumont-Graff, E., Coll, V., Cordel, J., Marion, M., Massal, N., Marlois, N., Tauzin, J. 2007a. Effect of alpha-casozepine (Zylkene) on anxiety in cats. Journal of veterinary behavior 2: 40-46.
• Beata, C, Beaumont-Graff, E., Diaz, C., Marion, M., Massal, N., Marlois, N., Muller, G. & Lefranc, C. 2007b. Effects of alpha-casozepine (Zylkene) versus selegiline hydrochloride (Selgian, Anipryl) on anxiety disorders in dogs. Journal of veterinary behavior 2: 175-183.
• Benoit, S., Chaumontet, C., Cakir-Kiefer, C., Tomé, D. & Miclo, L. 2016. The FASEB journal 30, supplement 125.4.
• Guesdon, B., Messaoudi, M., Lefranc-Millot, C., Fromentin, G., Tomé, D. & Even, P.C. 2006. A tryptic hydrolysate from bovine milk α_S1-casein improves sleep in rats subjected to chronic mild stress. Peptides 27: 1476-1482.
• Kato, M., Miyaji, K., Ohtani, N. & Ohta, M. 2012. Effects of prescription diet on dealing with stressful situations and performance of anxiety-related behaviors in privately owned anxious dogs. Journal of veterinary behavior: Clinical applications and research 7: 21-26.
• Landsberg, G, Milgram, B., Mougeot, I., Kelly, S. & de Rivera, C. 2016. Therapeutic effects of an alphacasozepine and L-tryptophan supplemented diet on fear and anxiety in the cat. Journal of feline medicine and surgery, 1-9.
• McDonnell, S.M., Miller, J. & Vaala, W. 2013. Calming benefit of short-term alpha-casozepine supplementation during acclimation to domestic environment and basic ground training of adult semi-feral ponies. Journal of equine veterinary science 33: 101-106.
• McDonnel, S.M., Miller, J. & Vaala, W. 2014. Modestly improved compliance and apparent comfort of horses with aversions to mildly aversive routine health care procedures following short-term alpha-casozepine supplementation. Journal of equine veterinary science 34: 1016–1020.
• Miclo, L., Perrin, E., Driou, A., Papadopoulos, V., Boujard, N., Vanderesse, R., Boudier, J.-F., Desor, D., Linden, G. & Gaillard, J.-L. 2001. Characterization of α-casozepine, a tryptic peptide from bovine α_S1-casein with benzodiazepine-like activity. The FASEB journal 15: 1780-1782.
• Miyaji, K., Kato, M, Ohtani, N. & Ohta, M. 2015. Experimental verification of the effects on normal domestic cats by feeding prescription diet for decreasing stress. Journal of applied animal welfare science 18: 355-362.
• Mizushige, T., Sawashi, Y., Yamada, A., Kanamoto, R., Ohinata. K. 2013. Characterization of Tyr-Leu-Gly, a novel anxiolytic-like peptide released from bovine α_S-casein. The FASEB journal 27: 2911-2917.
• Palestrinia, C., Mineroa, M., Cannasa, S., Bertesellia, G., Scagliaa,, E., Barbieria, S., Cavalloneb, E., Puricellic, M., Servidac, F. & Dall’Arac, P. 2010. Efficacy of a diet containing caseinate hydrolysate on signs of stress in dogs. Journal of Veterinary Behavior 5: 309-317.
• Werner, Y. 2013. Väitöskirja. Untersuchung zur Wirksamkeit von Zylkène® bei Hunden mit Trennungsangst. (Sis. englanninkielinen tiivistelmä). der Ludwig-Maximilians-Universität München. 124s. Linkki.